丙肝疫苗的研究現(xiàn)狀:核酸疫苗
核酸疫苗是將編碼某種抗原蛋白的外源基因(DNA 或RNA ) 直接導入動物體細胞內，并通過宿主細胞的表達系統(tǒng)合成抗原蛋白，誘導宿主產生對該抗原蛋白的免疫應答，以達到預防和治療疾病的目的。由于HCV結構的變異，與傳統(tǒng)蛋白質疫苗相比，DNA疫苗明顯優(yōu)于傳統(tǒng)疫苗。DNA疫苗克服了傳統(tǒng)病毒減毒疫苗、滅活疫苗或多肽疫苗所造成的抗原決定簇的改變，保持了完整的免疫原性；DNA疫苗既可誘導體液免疫又可誘導細胞免疫，而以后者為主要特征；DNA疫苗可在體內長期、穩(wěn)定表達外源蛋白，這為研制和開發(fā)利用多基因型與基因突變率高的病毒性疾病疫苗提供了理論依據(jù)。主要有C區(qū)DNA疫苗、E區(qū)DNA疫苗、C+E區(qū)DNA疫苗、Ns區(qū)DNA疫苗等。
Zhu等研究了以HCV E1、E2基困構建的重組質粒免疫BALB／c小鼠的免疫效果。結果表明：3次免疫后，所有小鼠均出現(xiàn)了抗El、E2抗體，抗E1抗體滴度最高達l：320，而抗F2抗體滴度最高達1：1280。淋巴細胞增殖實驗未見有針對E1的特異性增殖，而針對E2的增殖刺激指數(shù)平均為1.4，且免疫后的小鼠IFN-1的分泌也顯著高于對照組。Lagging等構建了C基因（第1-191aa）重組質粒pcDNA HCV Core，0.2 mg質粒肌肉注射免疫BALB／c小鼠2-3次后，于第6 wk處死小鼠，可檢測到較高水平的抗C抗體，免疫2次或3次的抗體滴度相似。這些結果提示HCV C區(qū)將有助于HCV疫苗的研制。以上實驗說明，HCV C區(qū)構建的重組質粒均能在真核細胞中表達，且能誘導出特異性體液免疫和細胞免疫，加上C區(qū)相對保守，是研制HCV DNA疫苗的主要靶抗原之一。Rollier等以HCV Ia基因型E2區(qū)不同基因片段構建了3種不同重組體，用im或im加iE等不同途徑免疫小鼠，抗體陽性率在60-100％之間?？梢奌CV DNA免疫，im加iE是最有效的方法。Ara等[9]將編碼結構區(qū)（C+E1+E2）基因片段（341-2449nt）克隆入含CMV啟動子的PRC載體中，構建HCV結構區(qū)DNA疫苗，通過哺乳細胞體外表達和免疫小鼠研究證實，其不僅能在Human293、BALB／c、cosl中表達C、E1、E2蛋白，而且還能誘導BALB／c小鼠產生抗體和特異性CTL的活性。另有人用HCV C+E2序列構建的質粒DNA疫苗免疫小鼠能誘導特異性的CTL活性、抗C和抗E2抗體應答，和Thl為主的增生有關。Lang等 [10]一證實在HCV NS3區(qū)存在一個CTL表位，其最小單位由10肽組成，推測其可作為HCV DNA疫苗構建的有效。
與傳統(tǒng)的蛋白質疫苗相比，DNA疫苗有可激發(fā)機體全面的免疫應答、可表達接近天然構象的抗原，抗原性強以及能聯(lián)合免疫等優(yōu)點。但同時，DNA疫苗仍有許多實際問題阻礙其發(fā)展。主要體現(xiàn)在：（1）HCV屬RNA病毒，具有高度的變異性；（2）只對人及黑猩猩易感；（3）難以體外培養(yǎng)；（4）缺乏有效的體外復制系統(tǒng)等問題，仍需進一步研究。
